铃壳、种子及棉纤维碳水化合物含量的测定

可溶性碳水化合物的提取液提取:

称取50mg已烘干的材料，加3m1 80%的乙醇，在80℃下提取半小时，离心（4200转/分，15分钟）取上清液，残渣加80%乙醇重复提取2次，合并上清液，在上清液加少量活性炭（10mg），80℃脱色30分钟（纤维不需要脱色），最后用80%的乙醇定容至10ml，用于铃壳、种子及棉纤维中总糖、蔗糖的含量测定。 淀粉提取液的提取:

取上述乙醇提取后的渣渍，向沉淀中加入2ml蒸馏水，沸水中糊化15分钟，冷却后加2ml 9.2M HClO4（高氯酸），搅拌15分钟，加蒸馏水4ml，混匀，在4200转/分下离心15分钟，将上清液转移入50ml的容量瓶，再向沉淀中加2ml 4.6M HClO4，搅拌15分钟，加5ml蒸馏水，混匀后离心 15min，合并上清液，用5ml蒸馏水洗涤沉淀1次，离心15分钟后，合并上清后定容至 50ml(25ml?)并混匀。转移2 ml至小离心管，10000转/分离心5分钟，用于淀粉含量的测定 总糖的测定

铃壳：取100μl的酒精提取液，加入3ml蒽酮试剂，90℃保温15分钟，在620nm处测定OD。取10-50μg 葡萄糖同法测定，做成标准曲线进行计算。

种子：取100μl的酒精提取液，加入3ml蒽酮试剂，90℃保温15分钟，在620nm处测定OD。取10-50μg 葡萄糖同法测定，做成标准曲线进行计算。

纤维：取100μl（17-38d）或200μl(45-52d)的酒精提取液，沸水浴浓缩至50-100μl，冷却至室温，加入3ml蒽酮试剂，90℃保温15分钟，在620nm处测定OD。取10-50μg 葡萄糖同法测定，做成标准曲线进行计算。 蔗糖的测定

吸取酒精提取液600μl ，沸水浴中加热浓缩至50-100μl ，加入100μl 30%的KOH，在沸水浴中放10min，冷却至室温。加入3ml蒽酮试剂，40℃放置10分钟后在620nm处测定光密度。同时取20-100μg蔗糖同法测定，做成标准曲线进行计算。 淀粉的测定

取0.5 ml淀粉提取液，混合3ml蒽酮试剂，100℃加热15分钟，冷却后，在620nm测定光密度（OD）。取20-100μg 葡萄糖同法测定，做成标准曲线进行计算。

附录

10-50μg 葡萄糖标准曲线的制作（300μ

管号

标准液（μl） 蒸馏水（μl）

0 0 300

1-2 50 250 10

3-4 100 200 20

5-6 150 150 30

l ）

9-10 250 50 50

7-8 200 100 40

葡萄糖量（μg） 0

注：葡萄糖标准液浓度为200μg/ml

20-100μg 蔗糖（葡萄糖）标准曲线的制作（500μ

管号

标准液（μl） 蒸馏水（μl） 蔗糖量（μg）

0 0 500 0

1-2 100 400 20

3-4 200 300 40

5-6 300 200 60

7-8 400 100 80

l ） 9-10 500 0 100

注：蔗糖标准液浓度为200μg/ml

试剂的配制

蒽酮：500mg经过纯化的蒽酮溶于500ml硫酸溶液（体积分数为76%,即380ml98%的浓硫酸加120ml蒸馏水），贮藏在棕色瓶中(冰箱保存2-3周)。

80%酒精：80ml95%的乙醇加蒸馏水15ml,即得95ml80%的酒精。 9.2M HClO（高氯酸）：将396ml的HClO（用蒸馏水定容至500ml. 4470%）