6th Edition, revised in June, 2014

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）

人肝细胞生长因子(HGF)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书

Human HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit 产品货号：E-EL-H0084c

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人肝细胞生长因子(HGF)酶联免疫吸附测定试剂盒

使用说明书

产品货号：E-EL-H0084c

（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）

声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中天然和重组HGF浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

试剂盒组成：

特别说明：

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）

#: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.

相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人HGF抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人HGF会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人HGF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人HGF抗体与结合在包被抗体上的人HGF结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，HGF浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中HGF的浓度。

样品收集:

1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集

血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可

检测。避免使用溶血，高血脂样品。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会

影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

具体处理方法可参考：http://www.elabscience.cn/index.php/resources/view/aid/17671.jsp 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻

存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。

8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先

做预实验，以确定稀释倍数）。

试验所需自备物品:

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结

晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液旋紧管盖，

静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为8000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：8000、4000、2000、1000、500、250、125、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制4000pg/mL标准品：取0.5mL8000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配

制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制

100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物成工作浓度。当日使用。

标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）

1 8000 2 4000 3 2000 4 1000 5 500 6 250 7 125 8 0 Tube pg/mL

洗涤方法:

1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。

2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸

去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液100μL，余孔分别加标准品或待测样品100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液100μL（在使用前15分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。

3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

4. 每孔加酶结合物工作液（临用前15分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育30分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右（根据实际显色情